ANALISIS JURNAL "Serological Evaluation of Brucella abortus S99 Lipopolysaccharide Extracted by an Optimized Method"

ANALISIS JURNAL 

Jurnal Utama : Serological Evaluation of Brucella abortus S99 Lipopolysaccharide Extracted by an Optimized Method

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah Lipopolysaccharide (LPS) dapat dengan efisien digunakan untuk mempromosikan sintesis tingkat tinggi anti Antibodi Brucella Abortus. Brucella abortus adalah bakteri yang dapat menyebabkan aborsi pada sapi dan demam yang melemahkan (undulant demam) yang dapat bertahan selama bertahun-tahun di manusia. Penyakit ini terdapat di seluruh dunia, dengan daerah tinggi endemisitas seperti Mediterania, Timur Tengah, Amerika Latin dan Asia. Insiden pada manusia berkisar luas antara daerah yang berbeda, dengan nilai-nilai hingga 200 kasus per 100.000 penduduk. Selanjutnya, menimbulkan antibodi bereaksi secara khusus dengan LPS diekstrak yang telah dipilih secara intramuskuler dan kemudian di administrasikan ke model hewan (ditunjukkan oleh AGID). 

Lipopolisakarida adalah salah satu faktor virulensi utama dan struktur yang paling imunogenik halus strain Brucella. Brucellosis adalah suatu penyakit global tergolong penyakit menular dan tidak ada berlisensi vaksin brucellosis manusia. Penelitian ini dilakukan untuk mengevaluasi potensi dimodifikasi lipopolisakarida yang diekstraksi (LPS) dari B. abortus untuk memperoleh spesifik anti-Brucella antibodi dalam model hewan (kelinci) sebagai bagian dari vaksin calon brucellosis. Brucellosis manusia memiliki berbagai macam klinis manifestasi, sehingga sulit untuk mendiagnosa klinis. Oleh karena itu, diagnosis harus dikonfirmasi dengan isolasi Brucella, sebagian besar dari kultur darah atau dengan deteksi respon imun terhadap antigen yang seperti lipopolisakarida (LPS). Diagnosis brucellosis secara eksklusif berbasis Brucella isolasi menyajikan beberapa kelemahan. Lambatnya pertumbuhan Brucella di primocultures dapat menunda diagnosis lebih dari 7 hari. Juga, sensitivitas kultur darah sering rendah, mulai dari (50-90%), tergantung pada penyakit panggung, spesies Brucella, medium kultur, jumlah beredar bakteri dan teknik kultur darah dipekerjakan [5,6]. Oleh karena itu, tes serologi memainkan peran utama dalam kasus-kasus ketika penyakit tidak dapat dideteksi oleh darah budaya. Namun, interpretasi dari tes ini seringkali sulit, terutama pada pasien dengan kronis brucellosis, di reinfeksi dan kambuh dan di daerah endemisitas, di mana sebagian besar dari populasi memiliki antibodi terhadap brucellosis. Banyak tes serologis telah digunakan untuk diagnosis brucellosis manusia. 

Tes yang paling umum digunakan adalah Serum yang Aglutinasi Test (SAT), yang Coombs anti-Brucella tes, Rose Bengal Test (RBT) dan komplemenfiksasi. Selama dekade terakhir, radioimmunoassay dan enzim immunoassay tes juga telah digunakan. Maskapai teknis kesulitan hadir sejak mereka membutuhkan tenaga terampil dan bahan-biaya tinggi. juga, interpretasi hasil enzim immunoassay adalah sulit karena variabilitas antigen dan teknisprosedur yang digunakan. Di antara teknik yang digunakan untuk diagnosis brucellosis manusia, SAT dan Tes Coombs yang paling sering digunakan dan kinerja mereka dalam diagnosis penyakit dan selama evolusi penyakit memiliki telah dipelajari secara menyeluruh. LPS dikenal sebagai utama Faktor virulensi Brucella dan LPS strain kekurangan memiliki kurang virulensi dan potensi kelangsungan hidup intra-seluler. Agarose Gel-Immuno Difusi (AGID) uji juga memiliki dilaporkan menjadi alat tes sederhana dan cepat untuk menunjukkan antibodi yang ditimbulkan terhadap Brucella antigen. 

Dalam penelitian ini, para peneliti awalnya melakukan ekstrak LPS B. Abortus S99 (S-LPS) melalui dioptimalkan metode seperti yang dijelaskan sebelumnya. Setelah biokimia evaluasi diekstrak S-LPS kami menganalisis respon imun humoral terhadap LPS diekstraksi dalam hewan model melalui tes serologis seperti mawar uji bengal, aglutinasi cepat (rapid wright) tes, Serum Aglutinasi Test (SAT atau wright test) dan 2- Uji ME Wright untuk menunjukkan IgM spesifik dan IgG antibodi menimbulkan melawan LPS disuntikkan. Selain itu, interaksi LPS dan antibodi anti-LPS ditunjukkan oleh Agarose Gel imunodifusi (AGID) assay. Untuk bahan dan metode, para peneliti mengelempokkannya menjadi point –point berikut : 

- Bakteri regangan dan produksi biomassa seluler 

Secara singkat, Mikroorganisme dikultur dalam miring Brucella agar menengah (Merck) pada 37 ± 1 ° C selama 72 jam dan kemudian dibiakkan dalam labu 5 L mengandung 2 L Brucella kaldu (Merck) untuk 72 jam untuk mencapai budaya benih. Budaya benih diinokulasi dengan 60 liter fermentor industri (Novapaljas, contactflow B.V, Belanda) dengan volume kerja 40 L. Akhirnya biomassa B. abortus S99 dinonaktifkan oleh (10%) fenol (w / w) dan dipanen melalui sentrifugasi pada 3800 rpm. 

- Prosedur Ekstraksi LPS dan Analisis kimia 

Seperti dijelaskan sebelumnya LPS dari B. abortus S99 diekstraksi dengan metode dioptimalkan berdasarkan pada ekstraksi fenol-air panas dan sampel diekstraksi kimiawi dianalisis untuk menentukan isi LPS, Keto Deoxy Octanate (KDO), protein dan nukleat asam 

- Uji Kelinci Pirogen 

Lima kelompok kelinci berat 2,5-3 kg disuntik dengan B. abortus S99 LPS pada konsentrasi 100, 10, 1, 0,1, atau 0,01 mg mL dalam 3 mL kg-1 berat badan. Setiap kelompok terdiri dari tiga kelinci. Suhu rektal awal adalah direkam sebelum suntikan dan setelah 30 menit kelinci diinokulasi dalam vena telinga. suhu yang mencatat setiap h selama 3 jam. Sebagai studi banding, pirogenitas E. coli LPS diuji oleh kelinci lain tes sama seperti B. abortus S99 LPS pirogen. tes menunjukkan adanya pirogen ketika salah satu tiga kelinci memiliki peningkatan suhu tubuh lebih tinggi dari 0,6 ° C atau ketika jumlah maksimum kenaikan suhu dalam tiga kelinci individu melebihi 1.4 ° C 

- Jadwal imunisasi 

10 mg mL-1 B. abortus S99 LPS menyuntikkan (intramuskular) kepada sekelompok 3 kelinci. Maka model hewan diinokulasi dengan suntikan penguat di 14 dan 28 hari setelah injeksi pertama. Hewan-hewan yang berdarah pada hari 0 (sebelum imunisasi apapun dan sebagai kontrol negatif), 14 (sebelum booster pertama injection), 28 (sebelum injeksi penguat kedua) dan 42 (dua minggu setelah suntikan kedua) dan sera kekebalan dipisahkan, dikumpulkan dan disimpan dalam -20 ° C. 

- Rose uji bengal (RBT) 

30 ml sera hewan dan 30 mL mawar antigen bengal (diperoleh dari bakteri vaksin dan antigen departemen produksi Pasteur Institute of Iran, Tehran) dicampur bersama-sama pada slide dan lembut mengguncang selama empat menit pada suhu kamar. Bersamaan proses yang sama dilakukan untuk standar antiserum (Pasteur Institute of Iran, Tehran) dan akhirnya sampel serum positif (mengandung anti-Brucella antibodi) dideteksi melalui pengamatan aglutinasi. 

- Cepat uji aglutinasi slide 

Serial pengenceran sampel serum hewan yang terbuat dari 1 / 20-1 / 640 pada skala (seluler) geser datar. Masing-masing sampel diencerkan dicampur dengan setetes antigen standar (Pasteur Institute of Iran, Tehran) dan dengan lembut mengguncang untuk min. Juga penurunan antigen standar ditambahkan ke salah satu kotak dari geser skala sebagai kontrol negatif. Serum tertinggi pengenceran menunjukkan (50%) aglutinasi dianggap sebagai titer serum. 

- Standar aglutinasi tes 

Serial pengenceran hewan sampel serum (0,5 mL) dibuat dari 1 / 20-1 / 5120 di 9 tabung yang berbeda. Kemudian 0,5 ml antigen standar (Pasteur Institute of Iran, Tehran) ditambahkan ke masing-masing sampel. Juga 0,5 mL antigen standar ditambahkan ke 0,5 mL salin normal sebagai kontrol negative. 

Dalam penelitian ini kekhususan disintesis antibodi dalam serum hewan diimunisasi untuk B. abortus S99 LPS diuji dengan agarose gel- Metode imunodifusi dibandingkan dengan E. coli LPS. Seperti yang disebutkan, dikumpulkan serum mengimunisasi hewan bereaksi cepat dengan B. abortus S99 LPS selama 30 menit pertama dari tes dan tajam garis presipitasi diamati antara sumur mengandung B. abortus S99 LPS dan sumur mengandung serum dikumpulkan dari hewan diimunisasi, sementara tidak ada curah hujan terjadi antara serum dikumpulkan dan E. coli LPS selama waktu yang sama. Menariknya tipis garis presipitasi antara dikumpulkan serum dan E. coli LPS diamati setelah 3 jam. Karena hewan telah disuntik dengan B. abortus S99 LPS (tidak E. coli LPS) itu dapat disimpulkan bahwa reaksi relatif ini mungkin tanda beberapa kesamaan struktural antara B. abortus S99 LPS dan E. coli LPS. Hal ini juga dilaporkan sebelumnya bahwa perbedaan struktural utama antara Brucella dan E. coli LPS adalah dalam rantai O dari kedua jenis LPS dan bagian lain dari struktur ini adalah hampir sama di Brucella dan E. coli. 

Kesamaan struktural dapat menyebabkan reaksi silang yang buruk antara antibodi yang ditimbulkan terhadap B. abortus S99 LPS dengan E. coli LPS dan tampaknya menjadi alasan utama reaktivitas serum dikumpulkan dari hewan diimunisasi dengan E. coli LPS dalam penelitian ini. Uji AGID sebelumnya telah diterapkan untuk mendeteksi sampel serum positif dari anjing yang terinfeksi dan ternak dengan strain kasar B. canis dan B. melitensis 16 M, masing-masing dan dilaporkan menjadi sensitif, cepat dan metode yang dapat diandalkan. Dalam penelitian ini, peneliti menunjukkan bahwa Metode ini akan digunakan secara efisien untuk kelancaran strain Brucella seperti B. abortus S99. Uji kelinci pirogen adalah salah satu tes Invivo ke mengevaluasi pirogenitas senyawa biologis seperti LPS dan antigen bakteri lainnya. 

Dalam penelitian ini peneliti mengevaluasi pirogenitas LPS dengan mengekstrak dari B. abortus S99 dibandingkan dengan E. coli LPS. Data yang disajikan peneliti ini mengkonfirmasi penelitian sebelumnya dan Fakta bahwa Brucella abortus LPS adalah 10.000 kali lipat lebih pirogenik daripada E. coli LPS, saat ini menurun yang pirogenitas senyawa imunogenik dengan asal mikroba adalah salah satu strategi untuk membuat mereka berlaku untuk percobaan Invivo dan imunisasi. Sayangnya, proses penurunan pirogenitas biasanya menyebabkan kurang imunogenisitas. Menurut fakta ini,penerapan B. abortus S99 LPS untuk Invivo dan tujuan imunisasi akan menguntungkan karena pirogenitas rendah dan tinggi potensi untuk menghasilkan antibodi terhadap Brucella. Dari penelitian ini dapat disimpulkan bahwa ekstrak LPS dari B. abortus S99 memiliki efisien untuk mempromosikan sintesis tingkat tinggi anti Antibodi Brucella,yang mana sampai sekarang belum ditemukan sintesis vaksin nya. 

Selanjutnya, menimbulkan antibodi bereaksi secara khusus dengan LPS diekstrak yang telah dipilih secara intramuskuler diadministrasikan ke model hewan (ditunjukkan oleh AGID). Potensi LPS untuk menginduksi titer tinggi tertentu antibodi terhadap Brucella secara paralel dengan rendah pirogenitas struktur cellwall ini (didefinisikan oleh rabi Uji pirogen) menunjukkan kemungkinan penggunaan komponen ini sebagai bagian dari sub-unit atau vaksin terkonjugasi untuk brucellosis manusia. Abortus (pada manusia) adalah berakhirnya kehamilan sebelum janin cukup berkembang untuk dapat hidup di luar kandungan yakni sebelum usia kehamilan 20 minggu dari tanggal hari pertama haid terakhir atau berat janin kurang dari 500 gram. Abortus masih merupakan masalah obstetrik yang belum banyak terungkap dan merupakan salah satu penyebab kematian ibu dan janin. [1] 

Jika aborsi dilakukan tidak sesuai dengan yang disebutkan dalam Undang – Undang Dasar 1945 pasal 28A tertulis “untuk hidup serta mempertahankan hidup dan kehidupan” dengan ini jelas bahwa janin yang masih dalam kandungan berhak untuk hidup. Menurut hukum – hukum yang berlaku di Indonesia, aborsi atau pengguguran janin termasuk kejahatan, maka hal itu digolongkan menjadi tindak pidana dan dapat dikenai hukuman. [2] 

Berkaca dari penelitian yang telah ditemukan,yakni vaksin untuk Brucella Abortus yang metode dan hasilnya telah diuraikan di atas, seharusnya angka kejadian aborsi, khususnya di negeri kita sendiri yakni Indonesia untuk jumlah aborsi lebih menurun, akan tetapi menurut penelitian secara kumulatif, aborsi di Indonesia diperkirakan mencapai 2,3 juta kasus per tahun. Setengah dari jumlah itu dilakukan oleh wanita yang belum menikah, sekitar 10-30% adalah para remaja.Artinya, ada 230 ribu sampai 575 ribu remaja putri yang diperkirakan melakukan aborsi setiap tahunnya. Sumber lain juga menyebutkankan, tiap hari 100 remaja melakukan aborsi dan jumlah kehamilan yang tidak diinginkan (KTD) pada remaja meningkat antara 150.000 hingga 200.000 kasus setiap tahun. [3] 

Hal ini tentu sangat memprihatinkan, bukankah Indonesia dikenal sebagai negara yang agamis dengan jumlah penduduk muslim terbesar. Dalam perkembangannya di Indonesia aborsi telah dilarang. Dan hukum tentang aborsi ini tercantum dalam pasal 299, 346, 347, 348, 349 dan pasal 535. Pada intinya pasal-pasal tersebut memberi sanksi terhadap pelaku aborsi, orang yang membantu praktek aborsi ( dokter, bidan, dukun beranak ), dan orang-orang yang mendukung dalam proses aborsi. [4]. 

Pengguguran kandungan yang terjadi dewasa ini lebih banyak didasarkan pada alasan sosiologis dibandingkan dengan alasan-alasan medis. Alasan-alasan sosiologis yang dimaksud adalah masih terlalu muda (terutama mereka yang hamil di luar nikah), aib keluarga, atau sudah memiliki banyak anak. Ada juga orang yang menggugurkan kandungan karena tidak mengerti apa yang mereka lakukan, mereka tidak tahu akan keajaiban-keajaiban yang dirasakan seorang calon ibu saat merasakan gerakan dan geliatan anak dalam kandungannya. [5] 

Untuk terhindar dari perilaku aborsi yang tidak diinginkan,kita dapat membentengi diri dengan iman yang kuat sebagai makhluk Tuhan dan manusia yang beragama, selain itu harus lebih bijaksana dalam bertindak, harus bisa lebih selektif dalam memlilih teman dan pergaulan hendaknya dijaga apalagi untukperempuan.jangan sampai melakukanaborsikarena itu berbahaya bukan hanya bagi kesehatan tapi juga emosional yang dapat menghantui sepanjang hidup. 

DAFTAR PUSTAKA 

1. Herlambang Noerjasin, Budi Handono, Hiroyuki Kuwano, Firman Fuad Wirakusuma. Korelasi antara kadar protein Bcl-2 dan kaspase-3 sebagai faktor risiko pada kejadian abortus. Jurnal. Maj Obstet Ginekol Indones Vol 34, No 1, Januari 2010 

2. Oktavianus Istiyanto . Aborsi Pelanggaran Terhadap Hak Asasi Manusia. Sekolah Tinggi Manajemen Informatika dan Komputer Amikom Yogyakarta. 2011 

3. Fuad Adam Abdillah. Makna Hubungan Seks bagi Remaja yang belum Menikah di kota Surabaya. Jurnal Sosial danPolitik Departemen Sosiologi, FISIP, Universitas Airlangga. 2010 

4. Margiantari, Heru Basuki, Ahmad Yudhie K. Stres Pada Wanita Yang Melakukan Aborsi Akibat Kehamilan Pranikah. Jurnal Universitas Gunadharma, 2010 

5. Sukron Rosyadi. Fenomena Perilaku Aborsi pada Remaja Putri di Surakarta. Jurnal Universitas Setia Budi Surakarta. 2009 

6. Ali Sharifat Salmani, Seyed Davar Siadat, Mohammad Reza Fallahian, Hojat Ahmadi, Dariush Norouzian, Parichehr Yaghmai, Mohammad Reza Aghasadeghi, Jalal Izadi Mobarakeh, Seyed Mehdi Sadat, Mehrangize Zangeneh dan Maryam Kheirandish. Serological Evaluation of Brucella Abortus S99 Lipopolysaccharide Extracted by an Optimized Method. American Journal of Infectious Diseases 5 (1) : 11-16, 2009 ISSN 1553-6203 © 2009 Science Publications.